在犬elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，我們經(jīng)常會(huì)遇到樣品濃度接近試劑盒的靈敏度，容易發(fā)生樣本od450值低于空白值的現(xiàn)象，特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果。基質(zhì)是指樣品中目標(biāo)分析物以外的部分。由于基質(zhì)成分會(huì)對分析過程有顯著干擾，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱為基質(zhì)效應(yīng)。這是開發(fā)和使用中需要避開的雷。
下面咱們來聊一聊犬elisa試劑盒的關(guān)鍵試驗(yàn)步驟：
1、重要的洗刷
如果洗刷不充分，會(huì)形成一系列的差異和高布景冬導(dǎo)致試驗(yàn)成果偏差大。如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中，那么它會(huì)添加布景噪音。條件答應(yīng)的情況下，恰當(dāng)添加洗刷液中的鹽濃度，這會(huì)阻撓非特異結(jié)合反響。如果布景過高，置疑洗刷不行時(shí)，能夠測驗(yàn)添加洗刷次數(shù)。
2、關(guān)鍵的關(guān)閉
關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的時(shí)機(jī)。如果布景過高，置疑關(guān)閉不充分，那么能夠測驗(yàn)運(yùn)用更高濃度的關(guān)閉液，或恰當(dāng)延長關(guān)閉時(shí)刻現(xiàn)在主要有兩種類型的關(guān)閉液，蛋白和非離子型去污劑。運(yùn)用的類型須取決于多個(gè)要素，包含微孔板的外表試劑、吸附的抗原、抗體和檢測試劑。好的關(guān)閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。
3、抗體濃度須優(yōu)化
如果試劑稍有不同，則可能需求優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會(huì)添加布景。為了防止這一點(diǎn)，切勿運(yùn)用過多的一抗或二抗。
4、檢測試劑要適量
必定不能夠運(yùn)用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或許未正確稀釋，則會(huì)導(dǎo)致高布景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入停止液。