novo cib的人腺苷激酶是一種活性且純化的 345-aa 短形式(14,2) adk 蛋白（39kda）通過 rt-pcr 擴(kuò)增從人肝癌細(xì)胞中提取的 mrna 進(jìn)行克隆并在大腸桿菌中表達(dá)?？寺〉?adk 序列（genbank 登錄號(hào) u50196）通過 dna 測(cè)序進(jìn)行確認(rèn)（ 同一性）。
腺苷激酶是核苷類似物激活的關(guān)鍵酶。
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adk 也是藥物發(fā)現(xiàn)的經(jīng)過驗(yàn)證的目標(biāo)：腺苷調(diào)節(jié)藥物已作為新的鎮(zhèn)痛和抗炎藥物 (4) 進(jìn)行了廣泛測(cè)試 (1)，用于治療精神分裂癥 (7) 或限制缺血性中風(fēng)后的腦損傷 (8) 。
腺苷激酶是一種普遍存在的酶，可催化 γ-磷酸鹽從 atp 轉(zhuǎn)移到腺苷 (ar) 的 5'-羥基，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能的重要調(diào)節(jié)劑，也是參與缺氧、炎癥和傷害感受的信號(hào)分子。腺苷激酶與腺苷脫氨酶一起調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的腺苷濃度。抑制腺苷激酶會(huì)導(dǎo)致局部腺苷濃度選擇性增加，并降低體內(nèi)癲癇發(fā)作易感性和傷害感受(3)。 adk 功能障礙與多種病理有關(guān)，包括糖尿病(13)、癲癇(6)和癌癥。因此，adk 成為藥物發(fā)現(xiàn)的合理治療靶點(diǎn)，腺苷調(diào)節(jié)藥物已被廣泛應(yīng)用。經(jīng)過測(cè)試(1)作為新的鎮(zhèn)痛和抗炎藥物(4)用于治療精神分裂癥(7)或限制缺血性中風(fēng)后的腦損傷(8)。人類adk的x射線晶體結(jié)構(gòu)已得到描述(9)，為合理設(shè)計(jì)和優(yōu)化新型adk抑制劑提供了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。此外，該酶負(fù)責(zé)多種治療上有用的核苷的磷酸化和隨后的臨床活性，包括抗病藥物利巴韋林(10)、免疫抑制藥物咪唑立賓(11)和抗癌 c-核苷噻唑呋林(12)。
單位定義： 1 個(gè)單位的腺苷激酶在 ph 8、37°c 下每分鐘將 1.0 µmole 肌苷和 atp 轉(zhuǎn)化為 imp 和 adp，由耦合的 impdh 酶系統(tǒng)測(cè)量。
比活性： ≥ 0.200 單位/毫克蛋白質(zhì)。
純度：通過12% aa sds-page控制。 測(cè)定條件：腺苷激酶與特定核苷底物的酶活性通過在偶聯(lián)的乳酸脫氫酶/丙酮酸激酶系統(tǒng)中的分光光度測(cè)定來測(cè)量。測(cè)定在 37℃、50mm tris-hcl ph7.6 下進(jìn)行； 50mm kcl、5mm mgcl 2、2.5mm atp、0.1mm nadh、1mm 磷酸烯醇丙酮酸、1mm dtt、pk 5u/ml、ldh 5u/ml。在 iems reader mf (labsystems) 微量滴定板讀數(shù)器中在 340 nm 處跟蹤反應(yīng)。核苷、核苷酸、ldh 和 pk 購自 sigma-aldrich。