薄層色譜法雖然操作較簡單，但對操作的要求很高，特別是點樣。如果操作不符合規(guī)范會導(dǎo)致分析結(jié)果出現(xiàn)很大的誤差。因此操作人員需要時刻注意使用使用薄層色譜法的注意事項。
1.薄層板的制備時，鋪板必須厚薄均勻一致，不能開裂。
2.薄層板晾干時應(yīng)避免陽光直射，以防開裂。
3.活化好的薄板應(yīng)保存在干燥器中備用。
4.點樣量對分離效果影響很大，樣品量過少，展開后斑點不清晰，影響觀察；樣品量過多，展開后拖尾嚴(yán)重，易造成rf值接近的斑點相連。
5.點樣時必須注意勿損傷薄層表面。
6.如果樣品濃度過稀，可在同一斑點處重復(fù)多次點樣(應(yīng)讓溶劑揮發(fā)后再點)。
7.點樣后要等溶劑揮發(fā)盡才能將薄板放入展開缸中展開。
8.選擇展開劑時要求展開劑對薄層吸附劑有一定親和力，能把被分離物從吸附劑表面解析下來，但又不能過強，否則被解析下來的物質(zhì)不易再吸附。當(dāng)單一溶劑不能滿足要求時，可用多元混合溶劑作展開劑。展開劑每次展開后，都需要更換，不能重復(fù)使用。
9.展開結(jié)束后，取出薄板要立刻用鉛筆畫下溶劑前沿。
10.溫濕度對薄層影響都很大。不凍結(jié)的提下，通常溫度越低分離越好。濕度的影響，主要是影響薄層板的吸附能力，導(dǎo)致選擇性(容量因子)的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實際情況確定。
11.rf值一般控制在0.3～0.8，當(dāng)rf值很大或很小時，應(yīng)適當(dāng)改變流動相的比例。