kras熱度已經(jīng)消退了？no...據(jù)調(diào)查，現(xiàn)在除傳統(tǒng)針對(duì)kras靶點(diǎn)小分子藥物外，更多玩家嘗試新興療法征服這一“不可成藥”的難題，如疫苗，tcr-t療法等。kras可以被細(xì)胞外信號(hào)以及來(lái)自細(xì)胞器等亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的信號(hào)所激活。在正常的生理環(huán)境下，野生型kras主要處于不活躍的gdp結(jié)合狀態(tài)。信號(hào)促使kras脫離gdp，并與gtp結(jié)合，將kras轉(zhuǎn)化為激活狀態(tài)。激活的kras能夠結(jié)合并激活效應(yīng)蛋白，如raf激酶、pi3k和ralgds，促進(jìn)下游級(jí)聯(lián)的信號(hào)通路，如mapk、pi3k和ral-gefs通路。這些信號(hào)通路通過(guò)細(xì)胞復(fù)制、生長(zhǎng)、分化和促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程。一個(gè)激活的致癌kras基因?qū)е乱粋€(gè)突變的kras蛋白，由于gtp水解率大大降低，異常長(zhǎng)時(shí)間保持其活性gtp結(jié)合狀態(tài)。當(dāng)kras蛋白被困在“on”位置時(shí)，下游效應(yīng)通路也保持活躍，細(xì)胞增殖率保持很高。其他仍然活躍的效應(yīng)通路包括那些促進(jìn)腫瘤發(fā)展過(guò)程的通路，如有絲分裂、細(xì)胞遷移、腫瘤侵襲和血管生成。一、高通量篩選試劑盒htrf®技術(shù)提供均相，免洗kras結(jié)合檢測(cè)試劑盒，通過(guò)這些已驗(yàn)證的試劑盒，可直接用于抑制劑篩選，無(wú)需優(yōu)化，每個(gè)試劑盒配有重組蛋白、檢測(cè)試劑和緩沖液。如下圖所示，使用抗tag1-sos1（供體）和抗tag2-xl665（受體）檢測(cè)tag1-sos1與tag2-kras-g12c之間的相互作用。當(dāng)供體和受體抗體由于sos1和kras-g12c結(jié)合而接近時(shí)，供體抗體的激發(fā)觸發(fā)向受體抗體的熒光共振能量轉(zhuǎn)移（fret），受體抗體在665nm處特異性發(fā)射。這種特異性信號(hào)與kras-g12c/sos1相互作用的程度成正比。因此，化合物或抗體阻斷kras-g12c/sos1的相互作用會(huì)導(dǎo)致htrf®信號(hào)的減少。使用已知抑制劑對(duì)試劑盒進(jìn)行驗(yàn)證，均獲得相應(yīng)較好的ic50并且與已報(bào)道文獻(xiàn)結(jié)果相一致。相關(guān)推薦：
貨號(hào) 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
63adk000cb15peg kras-wt/sos1 binding assay kit 500 tests
63adk000cb19peg kras-wt/raf1 binding assay kit 500 tests
63adk000cb47peg kras-g12d/raf1 binding assay kit 500 tests
63adk000cb17peg kras-g12d/sos1 binding assay kit 500 tests
63adk000cb20peg kras-g12c/raf1 binding assay kit 500 tests
63adk000cb16peg kras-g12c/sos1 binding assay kit 500 tests
63adk000cb22peg kras-g12v/raf1 binding assay kit 500 tests
63adk000cb28peg kras g12v gtp binding kit 500 tests
二、kras靶點(diǎn)相關(guān)蛋白全部kras相關(guān)蛋白均已原核表達(dá)系統(tǒng)（e.coli）進(jìn)行表達(dá)。通過(guò)htrf方式驗(yàn)證其結(jié)合活性。1、kras wtthe kras-wt activity was assayed with htrf technology. the reaction was performed by incubating the kras- wt protein, gtp, craf and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620nm signal.
2.kras-g12cthe kras-g12c activity was assayed with htrf technology. the reaction was performed by incubating the kras-g12c protein, gtp, craf and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620nm signal.3.kras-g12dthe kras-g12d activity was assayed with htrf technology. the reaction was performed by incubating the kras-g12d protein, gtp, craf and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620nm signal4.kras-g12rthe kras-g12r activity was assayed with htrf technology. the reaction was performed by incubating the kras-g12r protein, gtp, craf and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620nm signal.5.kras-g12vthe kras- g12v activity was assayed with htrf technology. the reaction was performed by incubating the kras- g12v protein, gtp, craf and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620nm signal.6.kras-g13cthe kras-g13c activity was assayed with htrf technology. the reaction was performed by incubating the kras-g13c protein, gtp, craf and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620nm signal.7.kras q61hthe kras-q61h activity was assayed with htrf technology. the reaction was performed by incubating the kras-q61h protein, gtp, craf and beads at 25℃ for 60 min, then reading ratio 665/620nm signal.8.sos19.raf相關(guān)推薦：
貨號(hào) 品名 規(guī)格
ua080001 kras 100μg
ua080002 kras[g12c] 100μg
ua080003 kras[g12v] 100μg
ua080004 kras[g12d] 100μg
ua080005 kras[g12r] 100μg
ua080006 kras[g13c] 100μg
ua080007 kras[g13d] 100μg
ua080008 kras[q61h] 100μg
ua080014 craf 50μg
ua080015 craf 50μg
ua080016 sos1 100μg
*以上kras蛋白無(wú)gtp bound，如需gtp bound，可聯(lián)系優(yōu)寧維。上述蛋白，常規(guī)規(guī)格有：50μg，100μg和1mg，如需更大規(guī)格，可聯(lián)系優(yōu)寧維定制。三、anti-tag抗體話說(shuō)，不想用試劑盒的情況下，如何建立assay呢？蛋白已經(jīng)有了，還差檢測(cè)抗體...這不就來(lái)了！anti-tag的htrf熒光抗體，在實(shí)現(xiàn)高通量，操作簡(jiǎn)便等其他技術(shù)優(yōu)勢(shì)的同時(shí)，可以為assay的建立提供最大的靈活性。無(wú)關(guān)乎蛋白本身，僅針對(duì)標(biāo)簽如his，gst，flag等，選擇對(duì)應(yīng)的配對(duì)抗體即可實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)開發(fā)。比如：參考上述蛋白kras g12c（his tag）和sos1（gst tag），選擇抗體配對(duì)有幾種方式可供參考：
kras donor sos1 accpetor
anti his eu anti gst xl665
anti gst d2
anti his tb anti gst xl665
anti gst d2
kras accpetor sos1 donor
anti his xl665 anti gst eu
anti his d2
anti his xl665 anti gst tb
anti his d2
ppi - europium detection buffer
ppi - terbium detection buffer
下圖為anti-gst-tb sos1與anti-his-xl665 kras g12c搭配組合展示。相關(guān)推薦：
anti-tag antibodies
貨號(hào) 品名 規(guī)格
61hisdlf mab anti 6his-d2 1000 tests
61hiskla mab anti 6his-eu cryptate 5000 tests
61hi2kla mab anti 6his-eu cryptate gold 5000 tests
61histlf mab anti 6his-tb cryptate 1000 tests
61hi2tlf mab anti 6his-tb cryptate gold 1000 tests
61hisxlf mab anti 6his-xl665 1000 tests
61mycdaf mab anti cmyc-d2 1000 tests
61myckla mab anti cmyc-eu cryptate 5000 tests
61myctaf mab anti cmyc-tb cryptate 1000 tests
61mycxlf mab anti cmyc-xl665 1000 tests
61dnpkla mab anti dnp-eu cryptate 5000 tests
61dnpxla mab anti dnp-xl665 5000 tests
61fg2dlf mab anti flag m2-d2 1000 tests
61fg2kla mab anti flag m2-eu cryptate 5000 tests
61fg2tlf mab anti flag m2-tb cryptate 1000 tests
61fg2xlf mab anti flag m2-xl665 1000 tests
61gstdlf mab anti gst-d2 1000 tests
61gstkla mab anti gst-eu cryptate 5000 tests
61gsttlf mab anti gst-tb cryptate 1000 tests
61gstxlf mab anti gst-xl665 1000 tests
610hadaf mab anti ha-d2 1000 tests
610hakla mab anti ha-eu cryptate 5000 tests
610hataf mab anti ha-tb cryptate 1000 tests
610haxlf mab anti ha-xl665 1000 tests
61mbpdaa mab anti mbp-d2 5000 tests
61mbpkaa mab anti mbp-eu cryptate 5000 tests
61mbptaa mab anti mbp-tb cryptate 5000 tests
buffers
貨號(hào) 品名 規(guī)格
61db9rdf ppi - europium detection buffer 200ml
61db10rdf ppi - terbium detection buffer 200ml
三、下游磷酸化蛋白檢測(cè)alpha®和htrf®技術(shù)基于細(xì)胞水平進(jìn)行下游kras信號(hào)通路的研究，包括mapk、pi3k和ral-gefs通路。這些細(xì)胞信號(hào)分析能夠區(qū)分化合物調(diào)節(jié)下游kras通路的功效。htrf®仍然利用夾心法原理，標(biāo)記的特異性抗體識(shí)別磷酸化蛋白和總蛋白從而進(jìn)行定量檢測(cè)。全過(guò)程無(wú)需洗滌，特異性好，靈敏度高。下圖為p-erk（圖左）和p-nfkb（圖右）磷酸化試劑盒靈敏度與wb對(duì)比，靈敏度高出30倍不等。與htrf®技術(shù)不同，alpha®雖然也是均相檢測(cè)檢測(cè)技術(shù)，但其基于化學(xué)發(fā)光原理，利用兩個(gè)微珠進(jìn)行檢測(cè)來(lái)實(shí)現(xiàn)更低的實(shí)驗(yàn)背景和超高靈敏度。一個(gè)抗體被生物素化并與鏈霉親和素包被的供體微珠結(jié)合，受體微珠則直接與另一個(gè)抗體結(jié)合?？贵w與磷酸化蛋白（總蛋白）結(jié)合使供體和受體微珠靠近。供體微珠的激發(fā)使得單線態(tài)氧擴(kuò)散至受體微珠，從而發(fā)射615nm波長(zhǎng)的光信號(hào)。alpha®的檢測(cè)信號(hào)與樣本中存在的磷酸化蛋白（總蛋白）的數(shù)量成正比。alpha®原理如下圖。相關(guān)推薦：
貨號(hào) 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
64nfbpeg nfkb phospho-s536 kit 500tests
64nftpeg nfkb total kit 500tests
64aerpeg advanced phospho-erk (thr202/tyr204)cellular kit 500tests
64nrkpeg total erk cellular kit 500tests
64me1peg phospho-mek1 (ser218/222) cellular kit 500tests
64ne1peg total mek1 cellular kit 500tests
64aktpeg phospho-akt1/2/3 (thr308) cellular kit 500tests
64akspeg phospho-akt1/2/3 (ser473) cellular kit 500tests
64nktpeg total akt cellular kit 500tests
64aktpeg htrf phospho-akt (thr308) detection kits 500tests
64torpeg phospho-mtor (ser2448) cellular kit 500tests
alsu-pakt-b500 alphalisasurefire ultraakt 1/2/3 (ps473) assay kit 500assays
alsu-takt-b500 total akt1/2/3 alphalisasurefire ultradetection kit 500assays
alsu-pmtor-c500 alphalisaphospho-mtor (ser2448) assay kit 500assays
alsu-tmtor-b500 alphalisa total mtor assay kit 500assays
四、3d細(xì)胞增殖基于atp的發(fā)光法測(cè)定細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的分析原理。用適當(dāng)緩沖液直接裂解細(xì)胞后，對(duì)細(xì)胞atp進(jìn)行定量。在裂解細(xì)胞釋放的atp作用下，atp與添加的熒光素反應(yīng)產(chǎn)生光。atplite 3d and atplite 1step 3d assay 操作流程如下：atplite 3d檢測(cè)可以允許細(xì)胞密度較高情況下進(jìn)行檢測(cè)，并且比2d檢測(cè)效果明顯。相關(guān)推薦：
貨號(hào) 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
6066736 atplite 1step 3d 10ml/100tests
6066943 atplite 3d 300tests
6016736 atplite 1step luminescence assay system 10ml
6016731 100ml
6016739 1000ml
6016943 300 assay
6016941 atplite luminescence assay system 1000 assay
6016947 5000 assay
6016949 10000 assay
四、微孔板耗材1.3d細(xì)胞培養(yǎng)板①板底為高度生物相容的，超低吸附力聚合物包被du有的合成聚合物mpc，源于細(xì)胞膜組分，與極性基團(tuán)的磷脂（磷脂酰膽堿）具有相同的結(jié)構(gòu)，提供自然生長(zhǎng)環(huán)境，并消除批間差異。②易形成形態(tài)大小均勻的球體細(xì)胞球體高質(zhì)量形成率，細(xì)胞形態(tài)均已一致，板材的均勻性高，可隨時(shí)聚焦進(jìn)行圖片拍攝，提供重復(fù)性更高的數(shù)據(jù)及更高效更高質(zhì)量的成像。③無(wú)需更換培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)的佳選擇圓底板，性價(jià)比高。相關(guān)推薦：
貨號(hào) 產(chǎn)品名稱 規(guī)格
6055330 cellcarrier spheroid ula microplates case of 10
6055334 case of 40
2. 其他相關(guān)培養(yǎng)板，檢測(cè)板
底透微孔板（view plate）
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用 顏色 特點(diǎn) 孔數(shù)目 case of 40 case of 50 case of 60 case of 160
化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn) 白色 底透，tc處理 96孔
6005181
384孔
6007480
黑色 底透，tc處理 96孔
6005182
384孔 6007460
標(biāo)準(zhǔn)微孔板（optiplate）
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用 顏色 特點(diǎn) 孔數(shù)目 case of 40 case of 50 case of 60 case of 160
化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn)熒光實(shí)驗(yàn) 白色 非底透 96孔
6005290
384孔
6007290
黑色 非底透，tc處理 96孔
6005270
384孔
6007270
細(xì)胞培養(yǎng)板（culturplate）
實(shí)驗(yàn)應(yīng)用 顏色 特點(diǎn) 孔數(shù)目
case of 50 case of 160 case of 200
細(xì)胞培養(yǎng) 白色 非底透，tc處理 24孔
6005168
96孔
6005680 6005688 6005689
384孔
6007680 6007688 6007689
黑色 非底透，tc處理 96孔
6005660 6005668 6005669
384孔
6007660 6007668
htrf*alpha檢測(cè)微孔板
應(yīng)用領(lǐng)域 顏色 特點(diǎn) 孔數(shù)目 case of 25 case of 50
case of 200
htrf實(shí)驗(yàn) 白色 非底透，潛孔 96孔 66pl96025
6005359
alpha實(shí)驗(yàn) 384孔
6008280
6008289
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