無(wú)菌制劑的藥企至少每半年需要一次無(wú)菌工藝模擬（aps），又稱為培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)（mft），以保證生產(chǎn)線的無(wú)菌生產(chǎn)。以往aps多用胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（簡(jiǎn)稱tsb）。但歐洲藥典ep 8.0-2014已提出非動(dòng)物源材料的優(yōu)先選擇原則，以避免動(dòng)物源成分可能帶來(lái)的bse/tse風(fēng)險(xiǎn)。bse/tse發(fā)生率低，但在動(dòng)物體內(nèi)有潛伏期，沒(méi)有明顯癥狀，且一旦發(fā)現(xiàn)，影響巨大，故who、fda與ce均有專章討論降低bse/tse發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的措施。我國(guó)近年發(fā)布的《無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)指南（無(wú)菌制劑）》、《無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)指南（無(wú)菌原料藥）》對(duì)此亦有提及：“包含動(dòng)物來(lái)源成分的培養(yǎng)基，應(yīng)考慮培養(yǎng)基引入外源污染的風(fēng)險(xiǎn)。如bse（可傳染性海綿腦?。?、tse（瘋牛病）等風(fēng)險(xiǎn)”，并說(shuō)“亦可使用植物來(lái)源的培養(yǎng)基”。（見(jiàn)《無(wú)菌工藝模擬試驗(yàn)指南（無(wú)菌原料藥）》6.3.2.4條）
如植物源tsb性能與動(dòng)物源tsb相符，且價(jià)格一致，則可不必考慮bse/tse等動(dòng)物源成分帶來(lái)的外源因子風(fēng)險(xiǎn)問(wèn)題。在性能方面，《指南》規(guī)定有“培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力試驗(yàn)”，所用標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試菌株包括白色念珠菌（cmcc98001）、黑曲霉（cmcc98003）、枯草芽孢桿菌（cmcc63501）、*（cmcc26003）、銅綠假單胞菌（cmcc10104）和生孢梭菌（cmcc64941）（必要時(shí)）等。“還可考慮加入環(huán)境和無(wú)菌檢查中發(fā)現(xiàn)的典型微生物。促生長(zhǎng)試驗(yàn)接種量應(yīng)小于100cfu。”
植物源tsb可采用濕熱滅菌和輻照滅菌，無(wú)論何種滅菌方式，均“應(yīng)對(duì)滅菌過(guò)程進(jìn)行驗(yàn)證，輻照滅菌還需在產(chǎn)品質(zhì)量報(bào)告中體現(xiàn)驗(yàn)證中所用的菌種和劑量等信息”。
早在2007年，journal of microbiological methods(微生物學(xué)方法期刊）就發(fā)表了美國(guó)atcc參與的一項(xiàng)研究，表明在促生長(zhǎng)能力方面，植物源tsb*可以替代動(dòng)物源tsb。菌株的表型會(huì)發(fā)生輕微的變化，但不影響菌株品系的遺傳學(xué)特征，即菌種鑒定不受影響。文中沒(méi)有提所用植物源tsb的品牌。
在推動(dòng)植物源培養(yǎng)基應(yīng)用方面，himedia公司走在世界前列，不僅將各種植物源培養(yǎng)基配方標(biāo)準(zhǔn)化，而且具有世界比較多的植物源培養(yǎng)基品種，不少被載入2010年美國(guó)cpc學(xué)術(shù)出版社出版的第四版《微生物培養(yǎng)基手冊(cè)》。在aps的應(yīng)用方面，himedia公司推出了一系列植物源tsb產(chǎn)品，具體如下：
1、植物源tsb（輻照），粉末型，貨號(hào)mv011g
2、植物源tsb（輻照），顆粒型，貨號(hào)gmv011g
3、植物源tsb（輻照），粉末型，含mtf指示劑，貨號(hào)mv2018g
4、化學(xué)限定tsb（輻照），粉末型，含mtf指示劑，貨號(hào)mcd2018g
值得一提的是，顆粒型和粉末型培養(yǎng)基相比，沒(méi)有揚(yáng)塵和受潮的問(wèn)題。tsb中添加mtf指示劑，可通過(guò)顏色變化顯著區(qū)分是否有菌，見(jiàn)下圖?；瘜W(xué)限定tsb的好處是無(wú)批間差異。
himedia生產(chǎn)的植物源tsb（輻照，粉末型，貨號(hào)mv011g）經(jīng)過(guò)嚴(yán)格而全面的質(zhì)控，合格后方能出廠。himedia生產(chǎn)工藝也具有iso9001、iso13485、who-gmp質(zhì)量體系認(rèn)證，產(chǎn)品具有美國(guó)fda注冊(cè)和歐盟ivdd注冊(cè)證書(shū)。
mv011g的部分質(zhì)控項(xiàng)目包括：
注：以下方法均根據(jù)美國(guó)藥典和歐洲藥典的方法進(jìn)行。
1、滅菌過(guò)程的驗(yàn)證
包括無(wú)菌檢查（連續(xù)14天30-35℃培養(yǎng)未觀察到細(xì)菌生長(zhǎng)，25-25℃培養(yǎng)未觀察到真菌生長(zhǎng)）和支原體檢測(cè)（pcr）。該無(wú)菌檢查同時(shí)也進(jìn)行有檢查過(guò)程的驗(yàn)證，即培養(yǎng)基用標(biāo)準(zhǔn)菌株接種≤100cfu進(jìn)行測(cè)試，細(xì)菌在20-25℃培養(yǎng)不超過(guò)3天，真菌不超過(guò)5天，以驗(yàn)證如有如下菌種，則該培養(yǎng)基即能檢查出來(lái)（表現(xiàn)為旺盛生長(zhǎng)）。具體所用菌株包括：*atcc25923、大腸桿菌atcc8739、大腸桿菌atcc25922、大腸桿菌nctc9002、銅綠假單胞菌atcc9027、銅綠假單胞菌atcc27853、藤黃微球菌atcc9341、阿博尼沙門(mén)氏菌nctc6017、肺炎鏈球菌atcc6305、枯草芽孢桿菌atcc6633、鼠傷*atcc14028、*atcc6538、白色念珠菌（atcc10231）、白色念珠菌（atcc 2019）、巴西曲霉（atcc 16404）。以上信息即回答了《指南》要求的“輻照滅菌還需在產(chǎn)品質(zhì)量報(bào)告中體現(xiàn)驗(yàn)證中所用的菌種和劑量等信息”。
2、培養(yǎng)基促生長(zhǎng)能力試驗(yàn)
菌株接種量≤100cfu，培養(yǎng)條件30-35°c 18-24小時(shí)。所用標(biāo)準(zhǔn)菌株有*atcc 6538、*atcc 25923、大腸桿菌 atcc 8739、大腸桿菌 atcc 25922
大腸桿菌nctc 9002、銅綠假單胞菌 atcc 9027、銅綠假單胞菌atcc 27853、枯草芽孢桿菌atcc 6633、藤黃微球菌atcc9341、鼠傷*atcc 14028、阿博尼沙門(mén)氏菌nctc6017、肺炎鏈球菌atcc 6305。以上菌株即已包括《指南》提到的幾乎所有菌株，只是用的是atcc來(lái)源的。對(duì)于《指南》提到的白色念珠菌（cmcc98001）和黑曲霉（cmcc98003），在滅菌驗(yàn)證中測(cè)試過(guò)。只有《指南》提到的生孢梭菌（cmcc64941）沒(méi)有測(cè)試，指南提到是必要時(shí)才去測(cè)試，企業(yè)可自行測(cè)試。
3、穩(wěn)定性檢查
這一點(diǎn)指南未作要求。himedia質(zhì)控要求室溫下放置7天，仍為淡黃色溶液，無(wú)任何沉淀產(chǎn)生。
總之，himedia生產(chǎn)的植物源tsb系列產(chǎn)品能滿足《指南》的各種要求，能夠給藥企的aps提供便利，值得大力推廣。
締一生物作為himedia公司中國(guó)區(qū)總代理，在制藥和生命科學(xué)領(lǐng)域，一如既往地為您帶來(lái)的服務(wù)。