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植物蛋白胨在細(xì)胞無血清培養(yǎng)中的應(yīng)用

發(fā)布時間:2024-04-19
由于tse和其他動物病毒的存在,替代改用非動物源材料逐漸成為藥廠的趨勢。其中,植物源蛋白胨越來越得到廣泛的應(yīng)用。它作為營養(yǎng)成分,不僅可用于微生物的培養(yǎng),而且可用于生產(chǎn)細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的開發(fā)。
早在2004年,比利時的研究機(jī)構(gòu)就發(fā)現(xiàn),植物蛋白水解物支持cho-320細(xì)胞的增殖和重組干擾素的表達(dá)1。
他們在已開發(fā)的無蛋白成分的培養(yǎng)基基礎(chǔ)上,添加一些植物蛋白水解物,發(fā)現(xiàn)整體培養(yǎng)基的性能即可達(dá)到含血清培養(yǎng)基的水平。研究人員發(fā)現(xiàn),在添加了燕麥蛋白水解物的無蛋白培養(yǎng)基中,微載體懸浮cho-320細(xì)胞,細(xì)胞在生物反應(yīng)器中分泌重組的干擾素γ提高了60%,大細(xì)胞密度升高了25%(和無添加其他成分的無蛋白成分培養(yǎng)基比較)。
在另一個小規(guī)模的灌流系統(tǒng)中,cho-320細(xì)胞在纖維微載體表面和內(nèi)部培養(yǎng),研究人員發(fā)現(xiàn)大米蛋白水解物能刺激重組ifn-r的分泌升高到30%(和對照組比較)。在生物反應(yīng)器中也得到了相似的結(jié)果。但在搖瓶中培養(yǎng)時,微載體內(nèi)存在著營養(yǎng)、氧氣和毒性代謝產(chǎn)物濃度梯度的局限。但隨著灌流速率的增加,葡萄糖濃度維持高于5.5mm,溶解氧為60%時,持續(xù)此狀態(tài)培養(yǎng)160小時,即能刺激ifn-γ的生成水平達(dá)到6.6μg/h/g微載體,細(xì)胞密度達(dá)到4x108細(xì)胞/g微載體。
研究人員認(rèn)為,植物蛋白胨可作為廉價的血清部分替代物,同時保證了生物安全性。該研究中同時公布了使用的無蛋白成分培養(yǎng)基的配方。5:5:1 (v:v:v) 比例混合iscove’s mdm, ham’s f12和nctc 135培養(yǎng)基,進(jìn)一步添加*到6mm終濃度,以及32.5mm nahco3,60μm乙醇胺,從而構(gòu)成了基礎(chǔ)培養(yǎng)基(bdm)。
要懸浮培養(yǎng)cho細(xì)胞,bdm中進(jìn)一步添加了0.1% pluronic f68,0.04pm ya硒suan鈉和500μm的檸檬酸鐵(鐵和檸檬酸1:1),從而終構(gòu)成了無蛋白成分培養(yǎng)基(pfs)。之后,即向pfs中添加了上述兩種植物蛋白水解物。
作者認(rèn)為,植物蛋白水解物刺激細(xì)胞生長和分泌,不單單是因為營養(yǎng)成分,很可能是因為其中多肽成分能和細(xì)胞表面的受體相互作用,從而發(fā)生效應(yīng)。
himedia公司是的培養(yǎng)基生產(chǎn)商,在開發(fā)有一系列的植物蛋白水解產(chǎn)品(hiveg標(biāo)識),這些植物蛋白來源包括玉米、豌豆、大豆、小麥、大米、燕麥、棉籽等。其中,細(xì)胞培養(yǎng)級的非動物源水解物有酵母粉、燕麥水解物、大豆蛋白胨、棉花水解物、乳清蛋白水解物(貨號tc733)等,出廠前均經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)測試,確保質(zhì)量。
himedia公司具有who-gmp認(rèn)證、iso9001,iso13485質(zhì)量體系認(rèn)證,以及產(chǎn)品的ce和fda注冊登記。其產(chǎn)品已行銷140多個。
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