化學(xué)試劑 mg (孔雀石綠) lmg (隱色孔雀石綠) c23h25n2 cas: 2437-29-8 c23h26n2 cas: 129-73-7 bg (亮綠) cv (結(jié)晶紫) c27h33n2 cas: 633-03-4 c25h30n3 cas: 548-62-9 建議的內(nèi)標(biāo)：d5-lmg。
ab液質(zhì)聯(lián)用儀色譜分離流動(dòng)相的制備： 1 m乙酸銨溶液：溶解77 g甲酸銨于1 l hplc級(jí)的水中。 流動(dòng)相a：在1 l hplc級(jí)的水中，加入1 ml甲酸，10 ml 1 m乙酸銨溶液。 流動(dòng)相b：在100 ml水中，加入1 ml甲酸，10 ml乙酸銨溶液，混勻后，用hplc級(jí)的乙腈稀釋到1 l。
樣品制備（魚、水產(chǎn)品） 基于bergwerff等人提出的方法[1]： 1．將2 ml ph=3.0的mcllvaine溶液、100 ml 1 m的p-tsa、50 ml的n,n,n,,n,-四甲基-1,4-苯乙烯二胺的甲 醇溶液(1 mg/ml)進(jìn)行混合； 2．加入2 g勻漿的樣品于50 ml螺絲加蓋的聚丙烯管中； 3．渦旋混合； 4．加入12 ml乙腈； 5．振搖15 min； 6．15 ℃下，3400 r/min離心5 min； 7．加入ph=6.0的mcllvaine溶液； 8．加入12 ml乙腈； 9．振搖15 min； 10．15 ℃下，3400 r/min離心5 min； 11．合并上清液；12．加入6 ml 二氯甲烷； 13．15 ℃下，3400 r/min離心5 min； 14．有機(jī)相進(jìn)行固相萃取。
基于effkemann等人提出的方法[2]： 1．稱量2 g勻漿過的魚肉組織； 2．加入100 µl內(nèi)標(biāo)溶液(d5-lmg，1 µg/ml)； 3．加入900 µl水； 4．加入2 ml鹽酸羥胺溶液(5 g/l)； 5．振搖并放置10 min； 6．加入8 ml乙腈； 7．振搖10 min； 8．4 ℃下，3000 r/min離心5 min； 9．將上清液吸入樣品，備用。 注意：新鮮的魚肉提取后，應(yīng)在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)完成分析，以防止孔雀石綠、隱色孔雀石綠的降解。
色譜分離條件 agilent 1100 系統(tǒng)：g1312a二元泵系統(tǒng)、g1367a型自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱。 ab液質(zhì)聯(lián)用儀色譜柱：phenomenex synergi max-rp反相柱，50 mm×2 mm，4 µｍ，80 å。 流動(dòng)相：a相—水 + 0.1%甲酸 + 10 mm 乙酸銨；b相—水 / 乙腈(10 / 90) + 0.1%甲酸 + 10 mm 乙酸銨。 梯度設(shè)置：