原理 :
細胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后,已基本上飽和,為使細胞能繼續(xù)生長,同時也將細胞數(shù)量擴大,就必須進行傳代(再培養(yǎng))。傳代培養(yǎng)也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以,而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。
操作步驟:
1、將長滿細胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。
2、加入0.5—1ml 0.25%溶液,使瓶底細胞都浸入溶液中?!?br> 3、瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移,原貼壁的細胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時將棄去,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。觀察消化也可以用肉眼,當見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。
附:消化液配制方法:稱取0.25克蛋白酶(活力為1:250),加入100ml無ca2+、mg2+的hank’s液溶解,濾器過濾除菌,4℃保存,用前可在37℃下回溫。