在運用羊elisa試劑盒測定抗體方面,通常所用的方法稱為間接法,也是目前常用的方法。其原理:間接法首先用抗原包被于固相載體,這些包被的抗原必須是可溶性的,或者至少是微小的顆粒,經洗滌,加入含有被測抗體之標本,再經孵育洗滌后,加入酶標記抗抗體,(對人的標本來說即加酶標抗人球蛋白igg、igm),再經孵育洗滌后,加底物顯色,底物降解的量,即為欲測抗體的量,其結果可用目測或用分光光度計定量測定。
今天咱們來聊聊會影響羊elisa試劑盒實驗結果的因素:
1、操作前應對實驗的物理參數有充分的了解,如環(huán)境溫度(保持在18c~25℃)、反應孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數等,要先查看水育箱溫度,是否符合要求。
2、顯色液量不可過多加樣的工作環(huán)境不能處于陽光直射的環(huán)境下,加顯色系統(tǒng)后要避光反應,顯色液量不能過多,以免顯色過強。
3、手工洗板加洗液時沖擊力不要太大,洗滌次數不要超過說明書推薦的洗滌次數,洗液在反應孑l內滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孑l間竄流,造成孔問污染,導致假陰性或假陽性。
4、要保證加液量一致,在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好,滴瓶不易控制加液量不準,造成顯色不統(tǒng)一,判斷錯誤。
5、正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑,避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺,血清殘留在反應孔壁上,加樣器吸頭要清洗干凈,避免污染,加樣次序要與說明書一致,否則可導致結果錯誤,實驗重復性差。
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關鍵詞:分光光度計