土壤脲酶(s-ue)活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：正式測定之前選擇預期差異大的樣本做預測定。
規(guī)格：100t/48s
產(chǎn)品內容：
試劑一： 甲苯2ml×1 瓶，4℃保存； (自備)
試劑二：粉劑×1 瓶，臨用前加入9ml蒸餾水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的試劑4℃保存；
試劑三：液體19ml×1 瓶，4℃保存；
試劑四a液：液體0.4ml×1 支，4℃保存；
試劑四b液：液體1.6ml×1 瓶，4℃保存；臨用前將a液倒入b液中混合，待用；用不完的試劑4℃保存一周；
試劑五：液體 2ml×1 瓶，4℃保存；
標準品：液體 1ml×1 支，1mg/ml氮標準液。
產(chǎn)品說明：
s-ue能夠水解尿素，產(chǎn)生氨和碳酸。土壤脲酶活性與土壤的微生物數(shù)量、有機物質含量、
全氮和速效氮含量呈正相關。土壤脲酶活性反應了土壤的氮素狀況。利用靛酚藍比色法測定脲酶水解尿素產(chǎn)生的nh3-n。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽、冰、甲苯(不允許快遞) 和蒸餾水。
操作步驟：
a.培養(yǎng)
測定管
對照管
風干土樣(g)
0.05
0.05
試劑一 (μl)
20
20
振蕩混勻，使土樣全部濕潤，室溫放置 15min
試劑二 (μl)
90
蒸餾水 (μl)
90
試劑三 (μl)
190
190
混勻，放入 37℃水浴培養(yǎng) 24h后， 10000g常溫離心 10min，取上清液。
b.將培養(yǎng)結束的上清液稀釋10 倍 (取0. 1ml上清液，加入0.9ml蒸餾水) 。若最終計算得到的δa仍大于0.5繼續(xù)稀釋。
c.標準品的準備：吸取適量的標準溶液，稀釋至10 、8 、6 、4 、2 、1 、0.5 、0μg/ml。
d.測氨量 (在微量玻璃比色皿或96 孔板中加入下列試劑)
測定管
對照管
標準管
稀釋后的上清液 (μl) /標準品
80
80
80
試劑四 (μl)
15
15
15
試劑五 (μl)
15
15
15
充分混勻，室溫放置 20min
蒸餾水 (μl)
90
90
90
混勻，于630nm處，蒸餾水調零，讀吸光值 a，計算δa=a測定管-a對照管。每個測定管設一個對照管。標準曲線的建立：根據(jù)標準管的濃度 (y) 和吸光度 ( x,減去濃度為 0 的空白管) ，做標準曲線。
脲酶活力計算
根據(jù)標準曲線，將δa帶入公式 (x) 計算測定中樣品的濃度 (μg/ml) y值。單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μgnh3-n定義為一個酶活力單位。
脲酶活力 (u/g土樣) ＝y(tǒng)×10×v反總÷w÷t=60×y
10：稀釋倍數(shù)；t：反應時間，1d；v反總：反應體系總體積，0.3ml；w：樣本質量，0.05g。
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