流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry，fcm）是一種對(duì)液流中排成單列的細(xì)胞或其它生物微粒（如微球，細(xì)菌，小型模式生物等）逐個(gè)進(jìn)行快速定量分析和分選的技術(shù)。
一、為什么要用同型對(duì)照？
同型對(duì)照是使用與一抗相同種屬來源、相同亞型、相同劑量和相同的免疫球蛋白及亞型的免疫球蛋白，用于消除由于抗體非特異性與細(xì)胞結(jié)合而產(chǎn)生的背景染色。同型對(duì)照是真正意思上的陰性對(duì)照，它不但可以用來設(shè)定流式細(xì)胞儀的電壓，而且還可以幫忙省去昂貴與繁瑣的重組細(xì)胞因子競(jìng)爭(zhēng)封閉步驟。
二、如何選擇同型對(duì)照？
分析流式結(jié)果時(shí)，不能因?yàn)榈玫搅藷晒庑盘?hào)就判斷細(xì)胞表面肯定結(jié)合有相應(yīng)的熒光素，從而得出細(xì)胞表達(dá)相應(yīng)的抗原分子的結(jié)論，而應(yīng)該比較該熒光信號(hào)與細(xì)胞的非特異性熒光，如果得到的熒光信號(hào)大于非特異性熒光，說明得到的熒光信號(hào)部分來源于熒光素的特異性熒光，就可以得出細(xì)胞表達(dá)相應(yīng)的抗原分子的結(jié)論。
所以，確定與熒光素?zé)o關(guān)的細(xì)胞自身的非特異性類光的強(qiáng)弱非常重要，而設(shè)立陰性對(duì)照就是為了確定細(xì)胞的非特異性熒光。
看看以下3類艾美捷整理的陰性對(duì)照流式分析比較全面的陰性對(duì)照：
第1類“negative”表示的是不加任何熒光素偶聯(lián)抗體時(shí)得到的熒光信號(hào)，因?yàn)闆]有標(biāo)記任何類光素，所以這組得到的熒光信號(hào)與熒光素?zé)o關(guān)，與細(xì)胞抗原分子cd69是否表達(dá)無關(guān)，得到的熒光信號(hào)代表的是非特異性熒光信號(hào)；
第2類“抗cd69”表示的是用抗cd69抗體標(biāo)記樣品細(xì)胞后得到的類光信號(hào)，雖然抗cd69抗體能修與細(xì)胞表面的cd69抗原分子結(jié)合，但是抗cd9抗體沒有偶聯(lián)熒光素，所以得到的熒光信號(hào)也與細(xì)胞表面是否表達(dá)有cd69分子無關(guān)，得到的熒光信號(hào)代表的也只是細(xì)胞本身的非特異性熒光信號(hào)，這種對(duì)照用于排除抗體的干擾；
第3類“igg1-pe”表示的是標(biāo)記與抗cd69抗體同種屬（來源于同一物種）且同類（抗cd69-pe中的抗體igg1類的）的非特異性抗體（igg1）與pe熒光素偶聯(lián)的同型（isotype）對(duì)照抗體（igg1-pe）后，得到的熒光信號(hào)，這種就屬于同型對(duì)照，其不能與細(xì)胞表面的cd69發(fā)生特異性結(jié)合，所以細(xì)胞表面不會(huì)結(jié)合有igg1-pe，得到的熒光信號(hào)是代表細(xì)胞本身的非特異性熒光，不屬于pe熒光素產(chǎn)生的特異性熒光信號(hào)，這種同型對(duì)照用于排除熒光素的干擾。
以上3種陰性對(duì)照，并不用全部設(shè)置齊全，一般只需要設(shè)置1種陰性對(duì)照就可以，其中第3種同型對(duì)照是常規(guī)的陰性對(duì)照設(shè)置法。
艾美捷exbio作為流式研發(fā)專家，可為您提供流式同型對(duì)照抗體：
宿主
同型對(duì)照
貨號(hào)
名稱
應(yīng)用
小鼠
igg1
11-457-c100
mouse igg1 isotype control，無標(biāo)記
fc (qc tested), ip, ihc(p), ihc(f), icc, wb, elisa
igg1 kappa
11-632-c100
mouse igg1 isotype control，無標(biāo)記
fc (qc tested), ip, wb, ihc(p), ihc(f), icc, elisa
12-632-c100
mouse igg1 isotype control 無標(biāo)記，低內(nèi)毒素
fc (qc tested), ip, wb, ihc(p), ihc(f), icc, elisa, func
1a-632-c100
mouse igg1 isotype control，apc標(biāo)記
fc (qc tested)
1b-632-c100
mouse igg1 isotype control，*標(biāo)記
wb, elisa, ihc(f), icc, ihc(p), ip, fc (qc tested)
1f-632-c100
mouse igg1 isotype control，fitc標(biāo)記
fc (qc tested)
1p-632-c100
mouse igg1 isotype control，pe標(biāo)記
fc (qc tested)
a4-632-c100
mouse igg1 isotype control，alexa fluor 488標(biāo)記
ihc(p), fc (qc tested), icc, ihc(f), wb
a6-632-c100
mouse igg1 isotype control，alexa fluor 647標(biāo)記
fc (qc tested), ihc(p), ihc(f), icc, wb
a7-632-c100
mouse igg1 isotype control，alexa fluor 700標(biāo)記
fc (qc tested)
igg2a
11-458-c100
mouse igg2a isotype control，無標(biāo)記
fc (qc tested), ip, ihc(p), ihc(f), icc, wb, elisa
mouse igg2a kappa
1a-724-c100
mouse igg2a isotype control，apc標(biāo)記
fc (qc tested)
1p-724-c100
mouse igg2a isotype control，pe標(biāo)記
fc (qc tested)
pc-724-c100
mouse igg2a isotype control，percp標(biāo)記
fc (qc tested)
igg2b
11-801-c100
mouse igg2b isotype control，無標(biāo)記
fc (qc tested), ip, ihc(p), ihc(f), icc, wb, elisa
igg2b kappa
1a-692-c100
mouse igg2b isotype control，apc標(biāo)記
fc (qc tested)
1b-692-c100
mouse igg2b isotype control，*標(biāo)記
wb, elisa, icc, ihc(f), ihc(p), ip, fc (qc tested)
1f-692-c100
mouse igg2b isotype control，fitc標(biāo)記
fc (qc tested)
igg3
11-459-c100
mouse igg3 isotype control ，無標(biāo)記
fc (qc tested), ip, ihc(p), ihc(f), icc, wb, elisa
l4-459-c100
mouse igg3 isotype control，dylight 488
fc (qc tested), ihc(p), ihc(f), icc, wb
l6-459-c100
mouse igg3 isotype control，dylight 650
fc (qc tested), ihc(p), ihc(f), icc, wb
igm
11-803-c100
mouse igm isotype control ，無標(biāo)記
fc (qc tested), ip, ihc(p), ihc(f), icc, wb, elisa
1f-803-c100
mouse igm isotype control，fitc標(biāo)記
fc (qc tested)
1p-803-c100
mouse igm isotype control，pe標(biāo)記
fc (qc tested)
l4-803-c100
mouse igm isotype control，dylight488標(biāo)記
fc (qc tested), ihc(p), ihc(f), icc, wb
大鼠
igg2a
11-168-c100
rat igg2a isotype control ，無標(biāo)記
fc (qc tested), ip, ihc(p), ihc(f), icc, wb, elisa
12-168-c100
rat igg2a isotype control ，低內(nèi)毒素
ihc(p), fc (qc tested), elisa, ip, ihc(f), icc, wb, func
1a-168-c100
rat igg2a isotype control，apc標(biāo)記
fc (qc tested)
1p-168-c100
rat igg2a isotype control，pe標(biāo)記
fc (qc tested)
igg2b
11-169-c100
rat igg2b isotype control ，無標(biāo)記
fc (qc tested), ip, ihc(p), ihc(f), icc, wb, elisa
12-169-c100
rat igg2b isotype control，低內(nèi)毒素
ihc(p), fc (qc tested), elisa, ihc(f), ip, icc, wb, func
1f-169-c100
rat igg2b isotype control，fitc標(biāo)記
fc (qc tested)
以下熒光標(biāo)記同型對(duì)照抗體案例展示：
使用小鼠igg3同種型對(duì)照（ppv-07）dylight®650抗體（樣品中濃度為5ug/ ml）對(duì)人外周血進(jìn)行的流式細(xì)胞儀表面非特異性染色模式。
文章來源：艾美捷科技