1、凱氏定氮法仍然是樹立各個具體辦法時選用的參閱規(guī)范辦法。
2、雙縮脲比色法是現(xiàn)在首要*的蛋白質(zhì)定量辦法。辦法操作簡便,盡管雙縮脲試劑有大同不異。其間酒石酸鉀納能夠穩(wěn)定在堿性溶液中的銅離子,含有dian化物作為抗氧化劑。雙縮脲反響生成的復合物其吸收峰為540nm??蛇x用*的規(guī)范牛血清白蛋白作為規(guī)范品,經(jīng)稱量,必要時用凱氏定氮法標定。各地質(zhì)控中心提供的混合規(guī)范血清可作為第二參閱,血清用量100μl,在10-120g/l濃度范圍內(nèi)呈杰出線性關系,批內(nèi)cv值<2%
3、染料結(jié)合法 蛋白質(zhì)可與某些染料特異結(jié)合,如氨基黑與考馬亮藍。這一性質(zhì)除了能夠用于電泳后的蛋白質(zhì)區(qū)帶染色,亦可用于總蛋白質(zhì)的定量。缺陷是多種蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合力不一致??捡R亮藍在與蛋白質(zhì)結(jié)合后的吸收峰從465nm移向595nm,這一性質(zhì)可用分光光度法來定量檢測。
4、選用沉淀反響進行散射比濁法 用磺柳酸、三氯醋酸等配方,此辦法甚為簡便,不需特殊儀器,技能關鍵在于:①選擇試劑濃度及溫度;②混勻技能;③選用的規(guī)范;④待測標本中的蛋白濃度。
5、選用280nm和215/225紫外吸收值,計算蛋白質(zhì)含量280nm 是由于蛋白質(zhì)分子中存在芳香族氨基酸所致。辦法的特異性和準確性受蛋白分子中該種氨基酸的含量比例影響甚大。尿酸和肝紅素在280nm附近有攪擾。紫外區(qū)200-225nm是肽健的強吸收峰。在此區(qū)域其吸收值為280nm的10-30倍,將血清稀釋1000-2000倍能夠消除攪擾物質(zhì)的影響。
6、基于蛋白分子中含有*和*而使用的酚試劑比色法由于各種蛋白質(zhì)分子中上述兩種氨基酸的組成比例不同,特別是白蛋白含*為0.2%,而γ-球蛋白中含量達2%-3%,導致較大的差異。lowry的改良法在酚試劑中參加cu2++,集中原法和雙縮脲反響兩者的效果,使呈色靈敏度進步。其間75%的呈色依賴于cu2++。反響產(chǎn)品吸收峰在650-750nm,辦法靈敏度為雙縮脲辦法的100倍左右。有利于檢測較微量的蛋白質(zhì)。但試劑反響仍易受多種化合物的攪擾。
7、染料結(jié)合法 蛋白質(zhì)可與某些染料特異結(jié)合,如氨基黑與考馬亮藍。這一性質(zhì)除了能夠用于電泳后的蛋白質(zhì)區(qū)帶染色,亦可用于總蛋白質(zhì)的定量。缺陷是多種蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合力不一致??捡R亮藍在與蛋白質(zhì)結(jié)合后的吸收峰從465nm移向595nm,這一性質(zhì)可用分光光度法來定量檢測