近日，中科院高能所李玉鋒研究員團(tuán)隊(duì)，以硒超富集植物-堇葉碎米薺（cardamine violifolia）單粒種子為研究對(duì)象，借助北京同步輻射裝置x射線熒光微分析實(shí)驗(yàn)站硬件和軟件功能升級(jí)契機(jī)，發(fā)展了基于同步輻射x射線熒光二維/三維成像技術(shù)（srxrf）、x射線吸收譜技術(shù)、二維質(zhì)譜成像技術(shù)（maldi-msi）及微區(qū)計(jì)算機(jī)斷層掃描（micro-ct）等技術(shù)的空間金屬組學(xué)（spatial metallomics）研究框架，實(shí)現(xiàn)了堇葉碎米薺單粒種子中有機(jī)硒和無機(jī)硒的原位二維/三維研究，發(fā)現(xiàn)堇葉碎米薺種皮中存在甲基硒代化合物，加深了對(duì)堇葉碎米薺富硒機(jī)制的理解，并以spatial metallomicsreveals preferable accumulation of methylated selenium in a single seed of the hyperaccumulator cardamine violifolia為題發(fā)表于 journal of agricultural and food chemistry（影響因子/jcr分區(qū)：5.895/q1）。該研究工作得到島津中國創(chuàng)新中心的實(shí)驗(yàn)支持。
圖1 journal of agricultural and food chemistry原文
背景介紹
硒(se)是動(dòng)物和人類必需的元素。它是硒蛋白和硒酶的重要組成部分，硒缺乏會(huì)增加各種神經(jīng)、內(nèi)分泌和癌癥風(fēng)險(xiǎn)，更嚴(yán)重的是，會(huì)導(dǎo)致器官衰竭和死亡。世界衛(wèi)生組織(who)和美國農(nóng)業(yè)部建議成人每日膳食硒攝入量為55 ~ 200 μg。然而，在一些地區(qū)，人們的日攝入量明顯低于推薦劑量(僅26 μg/天)，因此，探索富硒膳食補(bǔ)充劑來改善人們?nèi)粘Ｎ臄z入是很有必要的。
圖2 堇葉碎米薺
硒在植物生長周期內(nèi)無法被消耗，一些百合科、十字花科和豆科植物可累積高達(dá)幾千毫克/公斤的硒元素。原產(chǎn)于中國湖北省恩施市的堇葉碎米薺（cardamine violifolia）已被證明是硒的超富集植物，已用作膳食補(bǔ)硒劑原料。
l單粒種子中硒的原位空間分布和形態(tài)分布
堇葉碎米薺對(duì)于硒元素的耐受性和超積累的機(jī)制主要包括:(1)鈣蛋白和富半胱氨酸激酶的表達(dá)下調(diào)和硒結(jié)合蛋白的表達(dá)上調(diào); (2)體內(nèi)解毒硒的泛素基因或蛋白的表達(dá);(3) 堇葉碎米薺硒的特定代謝途徑。研究發(fā)現(xiàn)堇葉碎米薺可以通過硫酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體和各種s/se代謝酶來積累硒元素。而堇葉碎米薺中硒元素的主要存在形態(tài)為硒代半胱氨酸（secys），硒代蛋氨酸（semet），硒代羊毛硫氨酸，甲基硒代半胱氨酸（mesecys），甲基硒代蛋氨酸（mesemet），二甲基硒醚（dmse）和二甲基二硒醚（dmdse）等。
圖3 通過srxrf和maldi-msi研究硒在單粒種子中的原位空間分布和形態(tài)
研究結(jié)果表明，一方面srxrf結(jié)果顯示硒元素在整個(gè)種子中都有分布，子葉中硒含量相對(duì)高于外胚層/種皮；另一方面maldi-msi結(jié)果顯示dmse(m/z 107.970)、mesecys(m/z 184.019)和mesemet(m/z 212.983)主要存在于種子外胚層。硒植物毒性的一個(gè)突出原因被認(rèn)為是硒氨基酸(如secys)錯(cuò)摻入蛋白質(zhì)。已有研究表明，甲基化secys形成mesecys是se超富集物的一個(gè)關(guān)鍵耐受機(jī)制之一， 這大大減少了非特異性取代蛋白質(zhì)中的cys的secys的數(shù)量。本研究中mesecys的發(fā)現(xiàn)證實(shí)了這也是堇葉碎米薺的se耐受的重要機(jī)制之一。
質(zhì)譜成像maldi-msi方法
本研究中的質(zhì)譜成像部分使用島津imscopeqt (shimadzu, kyoto, japan)進(jìn)行。maldi-msi在光學(xué)顯微鏡的幫助下確定所需的采集區(qū)域，用激光二極管激發(fā)的摻釹釔鋁石榴石(nd/yag)激光(355 nm)照射種子組織切片。激光直徑為40 μm，掃描步長為80 μm。對(duì)每個(gè)像素進(jìn)行100次激光照射(1000 hz重復(fù)頻率)。所有數(shù)據(jù)均在正負(fù)模式下分別采集，采集范圍分別為m/z 100 ~ 500和m/z 500 ~ 1000。利用imagereveal ms分析軟件對(duì)所采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行圖像分析，最終得到顯示多種形態(tài)硒的具體分布。
圖4 島津新一代成像質(zhì)譜顯微鏡——imscopeqt
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