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小鼠鈣結合蛋白ELISA試劑盒檢測實驗條件選擇

發(fā)布時間:2024-04-14
elisa免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結合原理,對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法,酶聯(lián)免疫吸附分析(下稱elisa)是免疫分析的一種,分三個部分組成:免疫識別,信號輸出和數(shù)據(jù)處理。在elisa中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
1、固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
2、包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求ph在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的最適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的od值。選擇od值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數(shù)蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
3、酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接elisa法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
4、?酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如opd等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如tmb和abts是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是h2o2在臨用前加入。
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