cellsorter高速自動細胞分選
-挑選細胞后的成活率
分選后,將熒光細胞注入并在新的培養(yǎng)皿中進一步培養(yǎng)。ne-4c和3t3細胞在新培養(yǎng)皿中顯然具有活力并增殖,從而導致無標記細胞的熒光細胞單培養(yǎng)。由于基于細胞形態(tài)的小膠質(zhì)細胞的生存能力并不直接,因此我們完成了mtt測試。根據(jù)分類后的還原能力,大多數(shù)小膠質(zhì)細胞是可行的。
為了量化該技術(shù)的分類效率和細胞存活率,我們使用了未標記的3t3和ne-4c細胞。在初步實驗中,我們在自動檢測細胞后,用孔徑為62 mm的微型移液器吸取了數(shù)百個3t3細胞,真空度為12,000 pa。我們發(fā)現(xiàn)增加的真空度不會改變細胞存活率。我們還進行了實驗,以調(diào)查從cd1小鼠制備的原代神經(jīng)膠質(zhì)培養(yǎng)物的存活率。用*-edta對細胞進行3分鐘的預處理,在選擇分選并提取細胞的實驗中,其存活率為100%。
為了比較分選后的細胞與未分選但通過pdms表面經(jīng)過新培養(yǎng)皿的細胞的存活力,采用*-edta的常規(guī)方法,我們測量了正常傳代后的存活率,如``細胞存活率測定''一節(jié)中所述'。
短暫(30-60 s)*-edta處理后,我們在顯微鏡的相差模式下捕獲的培養(yǎng)圖像中手動標記了3-5個細胞。我們調(diào)整了連接到微量移液器的注射器的真空度,該注射器的孔徑為69 mm,并自動拾取細胞。0真空表示注射器中的環(huán)境壓力。然后將細胞注射到置于新皮氏培養(yǎng)皿中間的克隆圓筒中,以簡化隨后的細胞搜索。2小時后,我們在新培養(yǎng)皿中計數(shù)了活細胞。拾取效率計算為拾取的選定單元格數(shù)與所有選定單元格數(shù)之比。平均拾取效率為93 63t3和ne-4c分別為4%和100%。在一些實驗中,微量移液器從選擇進行分選的細胞附近收集了額外的細胞。這些單元的數(shù)量在“拾取的單元數(shù)”列中的1信號之后顯示。未選擇進行排序的單元格的拾取率是該數(shù)量與所有選定單元格數(shù)量的比率。3t3和ne-4c 的未選擇細胞的平均拾取率分別為11 6 12%和6 6 6%。將存活率計算為存活的細胞數(shù)與拾取的細胞數(shù)之比,包括未選擇的細胞。平均生存率為66 6 12%和88 63t3和ne-4c分別為16%。將平均比率計算為樣本平均數(shù)加權(quán)的每個比率的分母,即輸入單元格的數(shù)量。通過加權(quán)樣本方差除以實驗次數(shù)的平方根來近似均值誤差