那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)方法經(jīng)典攻略（一）：
不迷路
在結(jié)構(gòu)研究和體外生物化學(xué)分析等很多實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中都需要用到純化蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)可以從組織中獲取，亦或更經(jīng)常的是從模式生物中過量表達(dá)獲得，如細(xì)*菌、酵母或哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)等。蛋白質(zhì)純化主要是根據(jù)它們各不相同的物理性質(zhì)來從原料進(jìn)行分離，其目的就是希望能浪費(fèi)*少的雜蛋白，獲得*多的功能蛋白質(zhì)。一個(gè)好的蛋白質(zhì)的純化過程必須要將其純化工藝步驟優(yōu)化至*少。
蛋白質(zhì)純化工藝的建立
建立蛋白質(zhì)純化工藝時(shí)，*重要的是需要考慮純化得到的蛋白質(zhì)應(yīng)能滿足其后續(xù)應(yīng)用要求。蛋白質(zhì)的數(shù)量及純度都必須滿足實(shí)驗(yàn)分析要求。而且，因?yàn)楹罄m(xù)研究需要的是保持良好折疊結(jié)構(gòu)的活性蛋白質(zhì)，因此蛋白質(zhì)行為的相關(guān)信息也需要考慮。在純化及后續(xù)的保存過程中，很多處理方法都會(huì)對(duì)蛋白質(zhì)的性質(zhì)產(chǎn)生影響，如蛋白質(zhì)的去折疊、聚集、降解和失活等。制定詳細(xì)計(jì)劃，在*短時(shí)間內(nèi)完成蛋白質(zhì)純化，并在*穩(wěn)定的條件下進(jìn)行保存才算是成功地完成了其整個(gè)純化過程。
緩沖液體系
每一步純化過程中，蛋白質(zhì)的溶液環(huán)境對(duì)其穩(wěn)定性和活性的保持都非常關(guān)鍵。蛋白質(zhì)應(yīng)該保存在一個(gè)良好的緩沖液環(huán)境中，要避免突然的ph值變化，以其防止對(duì)蛋白質(zhì)折疊狀態(tài)、溶解性和活性造成不可逆的影響。
緩沖液是一種含有共軛酸/堿對(duì)的水溶液。緩沖液的ph值范圍根據(jù)其pka值決定。該pka值定義為50%的分子為酸式結(jié)構(gòu)，50%為堿式結(jié)構(gòu)時(shí)的ph值 （圖1）。
tris 25°c的pka值是8.06，表示當(dāng)ph=8.06，50%的tris是質(zhì)子化（酸式結(jié)構(gòu)），50%是去質(zhì)子化（堿式結(jié)構(gòu)）。
關(guān)于緩沖液的一個(gè)常規(guī)原則是，其ph值應(yīng)保證在pka值左右1個(gè)ph值單位范圍內(nèi)，從而保證其具有良好的緩沖能力。如此可以保證同時(shí)有足夠的以酸式結(jié)構(gòu)和堿式結(jié)構(gòu)存在的分子在加入 h+ 或者 oh- 時(shí)可以將它們中和。這樣，緩沖液就可以防止ph變化導(dǎo)致的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性改變。
一種好的緩沖液必須具有以下特征 :
1、水溶性
2、化學(xué)穩(wěn)定性
3、在所需ph范圍內(nèi)良好的緩沖能力
4、與分析和實(shí)驗(yàn)應(yīng)用條件具有良好的兼容性
5、與其他溶質(zhì)具有良好的兼容性
很多物質(zhì)都可以用于生物緩沖液。*常使用的緩沖液成分通常具有接近中性的pka值，可在生理ph值范圍左右使用。表1列出了4種*常用的生物緩沖液、各自的ph值應(yīng)用范圍及各自可能對(duì)蛋白質(zhì)純化過程產(chǎn)生影響的優(yōu)缺點(diǎn)。為保證足夠的緩沖能力，這些緩沖液的濃度通常為25mm。
以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)方法經(jīng)典攻略（一）。
我們上海嘉鵬科技有限公司是專業(yè)生產(chǎn)超蛋白純化系統(tǒng)、超微量核酸蛋白測(cè)定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、紫外分析儀、核酸蛋白檢測(cè)儀、紫外檢測(cè)儀、光化學(xué)反應(yīng)儀、旋渦混合器、恒流泵、自動(dòng)部分收集器等為核心的十幾個(gè)產(chǎn)品系列的廠家，歡迎大家前來訂購