賴(lài)氨酸-瓊脂糖凝膠4b是利用溴化氰法通過(guò)賴(lài)氨酸的α-氨基將其鍵合在瓊脂糖凝膠上，賴(lài)氨酸上游離的ε-氨基和α-羧基可以和一系列的生物分子相互作用。主要用于纖維蛋白溶酶原、血纖維蛋白溶酶原激活劑和核蛋白體核糖核酸的分離以及雙鏈dna的純化。
賴(lài)氨酸-瓊脂糖凝膠4b產(chǎn)品參數(shù)
產(chǎn)品名稱(chēng)：賴(lài)氨酸-瓊脂糖凝膠4b(lysine- sepharose 4 b)
貨號(hào)：s8911
基質(zhì)：6% 交聯(lián)瓊脂糖凝膠
配基： 賴(lài)氨酸
配基密度：4-7μmol/ml
顆粒大小：45-165μm
每毫升結(jié)合量：0.6mg血纖維蛋白溶酶原
大流速：75cm/h
工作ph：2~11
化學(xué)穩(wěn)定性：在所有的水溶性緩沖液中保持穩(wěn)定；
操作溫度：室溫
賴(lài)氨酸-瓊脂糖凝膠4b使用方法
1.裝柱
(1)將所有的試劑和填料達(dá)到室溫.配制初始緩沖液(平衡液)和緩沖液。
(2)根據(jù)柱子大小取所需凝膠的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液(按凝膠：緩沖液=3:1比例)配成勻漿。
(3)將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液體(液面略高于濾膜)，務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
(4)用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意不要使用氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
(5)打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò)，使柱床穩(wěn)定。用2-3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2.平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和ph不變。
3.上樣
可以根據(jù)上樣物質(zhì)的性質(zhì)選擇合適ph的緩沖液，通常建議使用ph 為7.5的磷酸鹽緩沖液。
4.洗脫
通常使用gao2m濃度的鹽溶液進(jìn)行洗脫，也可以選擇梯度洗脫或者溫度梯度洗脫。
5.再生
再生取決于樣品的性質(zhì)，賴(lài)氨酸瓊脂糖4 b可以用2 - 3床體積的高ph值(0.1 m tris-hcl，0.5 m氯化鈉，ph值8.5)和低ph值(0.1 m醋酸鈉，0.5 m氯化鈉，ph值4.5)交替洗滌再生。重復(fù)3次，緩沖液每次至少5柱床體積。
如果在分離的過(guò)程中使用了去垢劑或者變性劑，在再生的過(guò)程中也可以使用。
純化纖溶酶原后，應(yīng)該使用ph為7.5的 50 mm(含有1 m氯化鈉和0.2 m ε-氨己酸)的磷酸鹽再生。核酸純化后，用至少5倍柱體積的ph為7.5的的50 mm的磷酸鹽(含2 m氯化鈉)清洗再生。
6.在位清洗
在一些使用的程序中，如果存在不容易洗脫的沉淀蛋白或者脂類(lèi)物質(zhì)，可以用
0.1%的triton沖洗一分鐘，清洗完畢后，立刻用至少5倍柱體積緩沖液平衡柱子。
賴(lài)氨酸-瓊脂糖凝膠4b注意事項(xiàng)
(1)凍干的賴(lài)氨酸瓊脂糖凝膠4b 密封貯存于8°c以下干燥的地方，溶脹的凝膠應(yīng)貯存在4-8°c(保存溶液為20%乙醇)，不能冷凍。
(2)在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。