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石蠟組織切片制作全過程的注意事項

發(fā)布時間:2024-09-09
(一)石蠟切片注意事項
(1)組織脫水、透明和浸蠟 在脫水過程中,所用各級酒精的純度應(yīng)盡量保持,以便將組織內(nèi)的水分*脫去。在*中的時間不宜過長,以防組織過硬,造成切片不順暢。如果*中含有水分,則組織脫水不*。這種含有水分的組織二甲苯不能*浸入,造成切片無法透明而呈現(xiàn)混濁現(xiàn)象。此時可將組織重行在新*中脫水。透明所用二甲苯應(yīng)保持純度,否則透明難以充分,不利于石蠟滲透。組織在二甲苯中的時間需要嚴格掌握,時間過長則組織脆硬易碎,時間過短石蠟不易浸入。因為透明所需時間較短,所以透明時間必須注意。浸蠟的溫度不可以過高,一般應(yīng)調(diào)節(jié)在54~56℃。溫度過高時會使組織變脆。浸蠟時間應(yīng)適當(dāng)嚴格控制。
(2)包埋 石蠟溫度不可過高,以防燙傷組織。所用鑷子也不可燒得過燙,以免在取組織時灼傷組織,造成切片制成后的不良后果。包埋時應(yīng)根據(jù)觀察需要而選擇組織塊擺放方向。
(3)石蠟切片 切片刀要鋒利,否則切片時會自行卷起,導(dǎo)致不能順利將切片切成連續(xù)的條帶狀。切片刀如有缺口存在,切片會斷裂、破碎和不完整。切片機各個零件和螺絲應(yīng)旋緊,否則產(chǎn)生震動可導(dǎo)致切片厚薄不均。在搖動切片機時用力要均勻,避免震動。遇有較硬的腦、肝臟、脾臟等組織時,應(yīng)輕搖切片,以防組織由于震動而形成空洞現(xiàn)象。切片刀放置角度以200~300為好。過大則切片上卷,不能連接一起,過小則切片皺起。
(二)染色時注意事項
(1)作為染料的溶媒主要是蒸餾水和酒精,以蒸餾水為多。采用濃度較稀的染色液時,組織切片要經(jīng)過較長時間的浸染才可以得到滿意的染色效果。如果組織切片不易著色,可采用濃度較高的染色劑。染色劑ph與染色作用關(guān)系密切。染液或試劑有沉淀,用前應(yīng)過濾。
(2)組織切片的脫蠟應(yīng)*,否則染色效果不好,染色時間的長短需根據(jù)染色液對組織的染色作用、染色時的室溫條件、切片的厚薄、固定液的類別以及染色液的新舊等有所變異,染色時可使用顯微鏡觀察染色程度。一般增高溫度可促進染色,冬季室溫低時需加溫。
(3)分化是染色成敗的關(guān)鍵。分化不當(dāng)會引起染色不均、過淡或過深等現(xiàn)象。因此有必要在顯微鏡下觀察來進行控制。組織切片脫水、透明等步驟必須*,否則切片呈云霧狀。
(4)組織切片封固時,應(yīng)注意中性樹膠的濃度,以能滴下成珠為好,如果過稀則易于溢出蓋玻片,而且二甲苯揮發(fā)后的組織切片會因樹膠收縮而產(chǎn)生氣泡;如果過濃則在加上蓋玻片后,樹膠不易散開,出現(xiàn)氣泡時不易除去。
封固組織切片時,切片上可剩余適量二甲苯,過多或過少均可引起封固時產(chǎn)生氣泡。若切片見有少數(shù)氣泡時,可用眼科小鑷子輕壓消除。樹膠封固時要注意避免口、鼻呼出氣體接觸到載玻片,否則切片呈云霧狀。在潮濕的環(huán)境里,封固動作必須快速。樹膠不要滴得過多,以免溢出蓋玻片,但太少又不能到達蓋玻片邊緣。
(5)組織切片在染色前應(yīng)遮蓋保存,以防灰塵落入。染后的切片應(yīng)妥善保存,避免日光照射而褪色。在染色過程中,組織切片偶有脫離玻片現(xiàn)象,原因如下:載玻片不清潔;附片時的水溫過低;烤片時間不足或烤片溫度不夠而急于染色;組織塊脫水不好,影響后續(xù)的浸蠟和切片過程;組織過干或過硬,難切成片;浸蠟時間過長可致組織硬脆。
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