1、黃曲霉毒素免疫親和柱的適用范圍: 適合于陳皮、胖大海、僵蠶、酸棗仁、桃仁等中藥材品種。*執(zhí)行2010版中國藥典附錄ixv黃曲霉毒素測定法進行檢測。
2、黃曲霉毒素免疫親和柱的提取步驟:
取供試品粉末約15.0g(過二號篩),精密稱定,加入氯化鈉3.0g,置于均質瓶中,精密加入70%甲醇溶液75.0ml,高速攪拌2分鐘(攪拌速度大于11,000轉/分),離心5分鐘(離心速度2500轉/分),定性濾紙過濾、然后精密量取上清液15.0ml,置50ml量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,量取續(xù)濾液20.0ml,待凈化。
混合對照品溶液的制備:精密量取黃曲霉毒素混合標準品(黃曲霉毒素b1、b2、g1、g2標示濃度分別為1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml)0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,作為儲備液。
3、黃曲霉毒素免疫親和柱的凈化步驟:
1)回溫解凍:提前半個小時將黃曲霉毒素免疫親和柱從冰箱拿出常溫解凍;
2)上樣:準確移取20ml提取好的樣品溶液注入免疫親和柱,使溶液以1滴/s的速度通過免疫親和柱,直至2ml-3ml空氣通過柱體,棄去流出液;
3)淋洗:用20ml水淋洗免疫親和柱,流速為1滴/s--2滴/s,淋洗兩次。直至空氣進入免疫親和柱,直至2ml-3ml空氣通過柱體,棄去全部的流出液,抽干小柱;
4)洗脫:準確加入1.0ml甲醇洗脫,流速約為1滴/s,收集全部的洗脫液于干凈的離心管中,用甲醇-乙腈-水(40:18:42)定容至2ml,供液相色譜測定。