2013年,在《環(huán)境與可持續(xù)發(fā)展期刊》上,埃及研究中心水污染研究部及扎加齊克大學(zagazig)微生物學系對himedia公司生產的三款顯色培養(yǎng)基的性能進行了評估。這3款顯色培養(yǎng)基分別為:
1)hicrome aureus agar base及添加劑
2)m-cp agar base及添加劑
3)hicrome candida differential agar及添加劑
它們分別用于檢測水中的*、產氣莢膜梭菌和白色念珠菌。研究人員對himedia的顯色培養(yǎng)基的靈敏度、特異性和檢測閾限進行了評估。他們總共檢測了140個水的樣品,包括40個地下水水樣,70個尼羅河河水樣本,20個廢水樣本,10個海水樣本。分離的陽性菌落用pcr方法進行了確證。結果顯示,這些顯色培養(yǎng)基快速、特異、靈敏。
研究人員之所以開展這項研究,是因為盡管美國apha于2005年發(fā)布了水和廢水檢驗的美國標準方法,但仍存在一些相關問題,如病原體的難以鑒定,鑒定和分型所花的時間較長,支出較多。另外,水體需要*監(jiān)測病原體,這需要較好的監(jiān)測方法和篩查程序。顯色培養(yǎng)基現(xiàn)在已逐漸被接受,并被納入了標準方法。顯色培養(yǎng)基的種類和品牌也越來越多,一個顯色培養(yǎng)基有時會采用多種顯色劑,例如針對不同酶的產生綠色和紅色的顯色劑,這樣可形成綠色、紅色和紫色菌落。
在himedia這三種顯色培養(yǎng)基中,*顯色培養(yǎng)基在35-37℃孵育24-48小時,結果顯示,*為棕黑色菌落,有透明帶。m-cp培養(yǎng)基為厭氧培養(yǎng)44℃24-48小時,產氣莢膜梭菌菌落為黃色菌落,并在接觸氨氣后30秒內變?yōu)榉奂t色。念珠菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)30℃,40-48小時,白色念珠菌為淡綠色平滑菌落。由于均為水樣本,研究人員采用的是膜過濾的方法,濾膜孔徑為0.45m。研究人員用無菌鑷子將濾膜放到濾器上進行樣本過濾,再將可能含有致病菌的水樣過濾后的濾膜放到無菌平板上培養(yǎng)。
結果顯示,對于金葡菌顯色培養(yǎng)基的假陰性率和假陽性率均為0, 棕褐色為陰性菌;m-cp培養(yǎng)基上的綠色菌落為陰性菌落;念珠菌顯色培養(yǎng)基上,每90個菌落中就有9個為淺綠色陽性菌落,假陰性有1個(假陰性率為10%),為藍色菌落,假陽性率則為0。研究人員還發(fā)現(xiàn),不存在非典型菌株顯示典型菌株的典型顏色。終結論是,金葡和m-cp的靈敏度和特異性均為100%,而念珠菌顯色培養(yǎng)基靈敏度為90%,特異性為100%。
研究人員還就140個不同水樣的檢測結果進行了統(tǒng)計,得出顯色培養(yǎng)基對于不同水樣的靈敏度和特異性,見下表:
培養(yǎng)基
水類型
陽性菌落
陰性菌落
靈敏度(%)
特異性(%)
(n)
真陽性n(%)
假陽性n(%)
(n)
真陰性n(%)
假陰性n(%)
*顯色培養(yǎng)基
地下水
12
11(91.7)
1(8.3)
6
6(100)
0(0)
100
85.7
尼羅河河水
70
67(95.8)
3(4.2)
11
10(90.9)
1(8.9)
98.5
76.9
廢水
20
20(100)
0(0)
13
13(100)
0(0)
100
100
海水
10
9(90)
1(10)
3
3(100)
0(0)
100
75
梭菌顯色培養(yǎng)基
地下水
9
8(88.9)
1(11.1)
5
5(100)
0(0)
100
83.3
尼羅河河水
45
41(91.2)
4(8.8)
10
9(90)
1(10)
97.6
69.2
廢水
20
19(95.0)
1(5))
5
4(80)
1(20)
95
80
海水
5
5(100)
0(0)
2
2(100)
0(0)
100
100
念珠菌顯色培養(yǎng)基
地下水
2
2(100)
0(0)
2
2(100)
0(0)
100
100
尼羅河河水
62
60(96.8)
2(3.2)
8
7(87.5)
1(12.5)
98.4
77.8
廢水
20
19(95.0)
1(5.0)
5
4(80)
1(20)
95
80
海水
13
11(84.6)
2(15.4)
4
4(100)
0(0)
100
66.7
關于檢測閾限,研究人員分別用不同濃度的標準菌落摻入到水樣品中測試(具體濃度包括1-20cfu/100ml、20-80cfu/100ml、80-500cfu/100ml)。結果顯示,三種顯色培養(yǎng)基的對目標微生物的檢測閾限均小于20cfu/100ml,檢測閾限很低。
作者認為,傳統(tǒng)的水樣病原菌的檢測和計數(shù)方法非常耗時,且需要大量的確證試驗。并且,仍然需要快速靈敏的水中病原微生物的檢測手段,特別是對于飲用水。研究人員指出,himedia的*顯色培養(yǎng)基,性能甚至優(yōu)于市面上的科瑪嘉顯色培養(yǎng)基(科瑪嘉顯色培養(yǎng)基的靈敏度為76%,特異性為90%)。
后,作者歸納說:總之, mediad的這三款顯色培養(yǎng)基非常適合用于常規(guī)的實驗室日常工作,特別是它不需要任何的確證試驗。
himedia顯色培養(yǎng)基顯色結果圖(僅供參考)
圖1. hicrome aureus agar base(貨號m1468)
圖2. m-cp agar base(貨號m1354)
圖3. hicrome candida differential agar(貨號m1297a)
參考文獻
raed s. al-wasify, al-sayed a. al-sayed and mohamed m. kamel. sensitivity and specificity of chromogenic media for detection of some pathogens in water. international journal of environment and sustainability. 2013,2(1):1-9