機(jī)體受抗原刺激后,由淋巴系統(tǒng)的細(xì)胞(主要是b淋巴細(xì)胞分化后的漿細(xì)胞)產(chǎn)生具有特異性免疫功能球蛋白,即抗體。抗原物質(zhì)上能刺激b淋巴細(xì)胞的結(jié)構(gòu)部位叫做抗原決定簇,一個(gè)抗原具備多個(gè)抗原決定簇,只針對(duì)一個(gè)抗原決定簇起作用的漿細(xì)胞群就是一個(gè)純系,即一種克隆,由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體。機(jī)體受到抗原的刺激往往會(huì)針對(duì)抗原的多個(gè)抗原決定簇相應(yīng)的產(chǎn)生多克隆抗體,多克隆抗體能與抗原的多處抗原決定簇結(jié)合。由一種漿細(xì)胞克隆產(chǎn)生的特異性結(jié)合抗原單一抗原決定簇的抗體即為單克隆抗體。多克隆抗體可以看作是多種單克隆抗體的混合物??贵w是我們實(shí)驗(yàn)中zui常用到的一種物質(zhì)之一,抗體主要是分為單克隆抗體和多克隆抗體兩大類,單克隆抗體和多克隆抗體性質(zhì)上的區(qū)別:
1、特異性
多克隆抗體猶如許多單克隆抗體的集合,它們有的特異性高,有的特異性低,總體特異性符合正態(tài)分布曲線的形式,而其特異性的總體表現(xiàn)也應(yīng)處于統(tǒng)計(jì)學(xué)正態(tài)曲線中位線(mid)的水平。而單抗制備后續(xù)的篩選過程,可去除大部分的非特異抗體,保留幾株特異性較好的單克隆抗體。
一般而言,單克隆抗體的確具有更高的特異性。
多抗特異性可通過生產(chǎn)環(huán)節(jié)比如使用高純度的免疫原,以及使用提純的靶點(diǎn)蛋白對(duì)多抗進(jìn)行免疫親和層析純化等方法得以改進(jìn)。經(jīng)過免疫親和層析的多抗其總體特異性將大大提升,與單抗相比已相差無幾。
2、關(guān)于假陽(yáng)性
根據(jù)抗體最核心的表位結(jié)合區(qū)域—互補(bǔ)決定區(qū)(complementarity determining region,cdr)的結(jié)構(gòu),抗體通常可以緊密結(jié)合的抗原表面區(qū)域或表位面積很小,對(duì)于變性的肽段約在4-8個(gè)aa以內(nèi),以及5-7個(gè)單糖的糖鏈或6-8個(gè)核苷酸的核酸。通過肽段blast可以得知,小肽段序列wan全相同的情況將在很多不同蛋白上發(fā)生。這意味著單抗識(shí)別的這個(gè)表位可能并不僅僅屬于靶標(biāo)蛋白本身,也即意味著,即使利用純化抗原蛋白進(jìn)行了特異性篩選的單克隆抗體,當(dāng)用其檢測(cè)復(fù)雜樣本時(shí),也將面臨交叉反應(yīng)或假陽(yáng)性問題。
3、靈敏度
特異性決定了假陽(yáng)性結(jié)果的多少,敏感性決定了檢出率的高低。在復(fù)雜樣本中,由于多克隆抗體識(shí)別抗原的多個(gè)表位,可以在一個(gè)抗原分子上結(jié)合更多的抗體分子,也可以在當(dāng)部分抗原表位受到一定程度的遮蓋或破壞時(shí),仍有抗體結(jié)合在未受影響的表位上。這種情況常發(fā)生在如石蠟包埋的免疫組化(ihc-p)等實(shí)驗(yàn)中,當(dāng)樣本經(jīng)甲醛交聯(lián)固定后,即使經(jīng)過抗原修復(fù),抗原表位也不可避免地受到了影響,此時(shí)單克隆抗體由于只識(shí)別一個(gè)表位,結(jié)合能力可能大大降低甚至呈現(xiàn)陰性結(jié)果,而只要不是所有表位都受到了破壞,多抗仍可以獲得該靶點(diǎn)的陽(yáng)性結(jié)果。同樣的,對(duì)于樣本中一些表達(dá)豐度極低的蛋白,由于多表位結(jié)合更多抗體分子,檢測(cè)信號(hào)就將被放大。因此,使用多抗具有靈敏度和檢出率上的優(yōu)勢(shì)。