分子生物學(xué)常用試劑的配制
瓊脂糖凝膠的配制
根據(jù)所需凝膠的濃度秤取瓊脂糖，加入相應(yīng)電泳緩沖液中，用微波爐加熱煮沸至瓊脂糖*溶解，加入適量eb混勻，適當(dāng)冷卻后傾入凝膠鑄槽中，插入梳子，凝膠厚度不超過(guò)梳孔，如有氣泡產(chǎn)生則用玻璃棒驅(qū)除，不能過(guò)早拔除梳子，應(yīng)待凝膠*凝結(jié)后才能拔除梳子。
3.p1、p2、p3的配制p1的配制：在800ml去離子水中溶入tris堿6.06g，na2edta?2h2o3.72g，用hcl調(diào)整ph至8.0，用去離子水調(diào)整容積至1升，每升p1內(nèi)加入rnasea100mg。
p2的配制：在950ml去離子水中溶入naoh8.0g，20%sds50ml，調(diào)整容積至1升。
p3的配制：在500ml去離子水中溶入*294.5g，用冰醋酸調(diào)整ph值至5.5，用去離子水調(diào)整容積至1升。
4.常用緩沖液：
te
ph7.4
10mmol/ltris?cl(ph7.4)
1mmol/ledta(ph8.0)
ph7.6
10mmol/ltris?cl(ph7.6)
1mmol/ledta(ph8.0)
ph8.0
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
1mmol/ledta(ph8.0)
ste(亦稱(chēng)ten)
0.1mmol/lnacl
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
1mmol/ledta(ph8.0)
stet
0.1mmol/lnacl
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
1mmol/ledta(ph8.0)
5%tritonx-100
tnt
10mmol/ltris?cl(ph8.0)
150mmol/lnacl
0.05%tween20
電泳緩沖液
tris-乙酸(tae)：50×濃貯存液(每升)：242gtris堿
57.1ml冰乙酸
100ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
使用時(shí)再稀釋50倍。
tris-磷酸(tpe)：10×濃貯存液(每升)：108gtris堿
15.5ml85%磷酸(1.679g/ml)
40ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
使用時(shí)再稀釋10倍。
tris-硼酸(tbe)：5×濃貯存液(每升)：54gtris堿
27.5g硼酸20ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
使用時(shí)再稀釋10倍。
堿性緩沖液：1×使用液(每升)：5ml10mol/lnaoh
2ml0.5mmol/ledta(ph8.0)
tris-*：5×濃貯存液(每升)：15.1gtris堿
94g*(電泳級(jí))(ph8.3)
50ml10%sds(電泳級(jí))
2×sds凝膠加樣緩沖液
100mmol/ltris?hcl(ph6.8)
200mmol/l二硫蘇糖醇(dtt)
4%sds(電泳級(jí))
0.2%溴酚藍(lán)
20%甘油
30%丙烯酰胺：
將29g丙烯酰胺和1gn,n’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中，加熱至37℃溶解之，補(bǔ)加
水至終體積為100ml。用nalgene濾器(0.45孔徑)過(guò)濾除菌查證該溶液的ph值應(yīng)不大于7.0，置棕色瓶中
保存于室溫。
10mol/l乙酸銨：
把770g乙酸銨溶解于800ml水中，加水定容至1l后過(guò)濾除菌。
1mol/lcacl2：
在200ml純水中(milli-q水或相當(dāng)級(jí)別的水)溶解54gcacl2?6h2o，用0.22濾器過(guò)濾除菌，分裝成10ml小份貯存于-20℃。
2.5mol/lcacl2：
在20ml蒸餾水中溶解13.5gcacl2?6h2o，用0.22濾器過(guò)濾除菌，分裝成1ml小份貯存于-20℃。
1mol/l二硫蘇糖醇(dtt)：
用20ml0.01mol/l乙酸鈉溶液(ph5.2)溶解3.09gdtt，過(guò)濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。
0.5mol/ledta(ph8.0)：
在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(edta-na?h2o)，在磁力攪拌器上劇烈攪拌，用naoh調(diào)節(jié)溶液的ph值至8.0，然后定容至1升，分裝后高壓滅菌備用。
溴化乙錠(10mg/ml)：
在100ml水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時(shí)以確保其*溶解，然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中，保存于室溫。
1mol/lmgcl2：
在800ml水中溶解203.3gmgcl2?6h2o，用水定容至1升，分裝成小份并高壓滅菌備用。
酚：：
把酚和等體積混合后用0.1mol/ltris?cl(ph7.6)抽提幾次以平衡這一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆蓋等體積的0.01mol/ltris?cl(ph7.6)液層，保存于4℃。
磷酸緩沖鹽溶液(pbs)：
在800ml蒸餾水中溶解8gnacl、0.2gkcl、1.44gna2hpo4和0.24gkh2po4，用hcl調(diào)節(jié)溶液的ph值至7.4，加水定容至1升，高壓蒸汽滅菌20min。保存于室溫。
乙酸鉀溶液(用于堿裂解)：
在60ml5mol/l乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成鉀濃度為3mol/l而乙酸根濃度5mol/l的溶液。
3mol/l乙酸鈉(ph5.2和7.0)：
在800ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉，用冰乙酸調(diào)節(jié)ph值至5.2或用稀乙酸調(diào)節(jié)ph至7.0，加水定容至1升，分裝后高壓滅菌。
1mol/ltris：
在800ml水中溶解121.1gtris堿，加入濃hcl調(diào)節(jié)ph至所需值。
phhcl
7.470ml
7.660ml
8.042ml
應(yīng)使溶液冷至室溫后方可后調(diào)定ph值，加水定容至1升，分裝后高壓滅菌。
tris緩沖鹽溶液(tbs)：
在800ml蒸餾水中溶解8gnacl、0.2gkcl和3gtris堿，加入0.015酚紅并用hcl調(diào)ph值至7.4，用蒸餾水定容至1升，分裝后在15lbf/in2(1.34×105pa)高壓下蒸汽滅菌20分鈡，于室溫保存。
5mmol/lnh4ac溶液：
秤取乙酸銨192.7g，加重蒸水250ml混勻，加重蒸水定容至500ml，1.1kg/cm2滅菌20min。
10mg/mlbsa(小牛血清白蛋白)溶液：
秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml滅菌重蒸水中。置4℃冰箱貯存?zhèn)溆谩?br>10%十二烷基硫酸鈉(sds)：
在900ml水中溶解100g電泳級(jí)sds，加熱至68℃助溶，加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的ph值至7.2，加入水定容至1l，分裝備用。