2019年3月1日，美國食品和藥物管理局(fda)在發(fā)布血管緊張素ii受體阻滯劑（arbs）藥物氯沙坦的自愿召回公告，涉及到印度hetero labs ltd.生產(chǎn)的87批氯沙坦鉀片，而導(dǎo)致該召回的主要原因是發(fā)現(xiàn)其中含有n-亞硝基-n-甲基-4-氨基丁酸（nmba）雜質(zhì)。由于nmba是已知動物和潛在人類的致癌化學(xué)物質(zhì)，是繼n−亞硝基二甲an（ndma）和n−亞硝基二乙胺（ndea）之后上市arbs藥物中檢測到的第三種亞硝胺類遺傳毒性雜質(zhì)。此后，fda相繼公布了teva pharmaceuticals和vivimed life sciences pvt ltd等制藥公司自愿召回涉及氯沙坦鉀的63批藥品，其原因?yàn)闄z出含有nmba。同時，加拿大衛(wèi)生部（hc）及英國衛(wèi)生部（dhsc）也在上發(fā)布了氯沙坦類藥物的召回公告。直至2019年6月12日，teva pharmaceuticals仍在擴(kuò)大自愿召回7批檢出nmba氯沙坦鉀片，可見藥物中的遺傳毒性雜質(zhì)仍受到公眾及藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)的高度關(guān)注。
在fda已公布的arbs藥物亞硝胺雜質(zhì)限度表中，nmba的日允許攝入量大值為0.96ppm。 fda評估了暴露于9.82ppm水平nmba相比于終生暴露于0.96ppm nmba的服藥水平，表明6個月的暴露量不會存在患癌風(fēng)險。
n-亞硝基-n-甲基-4-氨基丁酸（nmba）
n-nitroso-n-methyl-4-aminobutyricacid(nmba)
cas. 61445-55-4
因此，為了確保患者在緩沖期可獲得氯沙坦類藥物，fda不反對含nmba低于9.82ppm的氯沙坦保持銷售。該過渡緩沖期fda設(shè)為6個月，直至生產(chǎn)企業(yè)提供亞硝胺雜質(zhì)符合要求的氯沙坦藥物來填補(bǔ)市場。
目前，關(guān)于氯沙坦鉀中nmba的檢測方法尚未見公開報道，為及時應(yīng)對市場檢測需求，島津中國*推出了基于lc-ms/ms技術(shù)的檢測方法，該方法操作簡單，靈敏度高，適用性強(qiáng)，可有效用于氯沙坦鉀中nmba的分析檢測。
1、 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 儀器：lcms-8050三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用儀，含有：lc-30ad×2輸液泵，dgu-20a5r在線脫氣機(jī)，sil-30ac自動進(jìn)樣器，cto-30a柱溫箱，cbm-20a系統(tǒng)控制器，lcms-8050三重四極桿質(zhì)譜儀，labsolutions（version 5.82 sp1）色譜工作站。
1.2 分析條件：
液相色譜條件
質(zhì)譜條件
1.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液：取nmba標(biāo)準(zhǔn)貯備液，以純甲醇逐級稀釋為0.5、1、2、5、10、20、50、100 ng/ml的八個不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
1.4 樣品溶液：取氯沙坦鉀三批原料藥（符合ep9.0）0.1 g于10 ml容量瓶中，加甲醇適量，超聲1 min至全部溶解，放冷至室溫，用甲醇定容待測。
2、 結(jié)果
2.1標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖
圖1. nmba標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖（100 ng/ml）
（黑色-總離子流；粉色-mrm147.15/117.10；藍(lán)色-mrm147.15/87.10；棕色-mrm147.15/44.10）
2.2 線性關(guān)系及檢出定量限
圖2. nmba標(biāo)準(zhǔn)曲線
檢出限（lod）0.5 ng/ml(mrm147.15/117.10)，定量限（loq）1.0 ng/ml (mrm147.15/117.10)
2.3 精密度實(shí)驗(yàn)：10 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液為樣本連續(xù)進(jìn)樣，日內(nèi)及日間保留時間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差低于0.1%，峰面積低于1.10%。
2.4 加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)
取0.1 g氯沙坦鉀樣品于10 ml容量瓶中，加入nmba標(biāo)準(zhǔn)品溶液(相當(dāng)于50、100、200 ng nmba標(biāo)準(zhǔn)品)，按照1.4中的方法進(jìn)行處理，上機(jī)分析。加標(biāo)的氯沙坦鉀溶液色譜圖（以200 ng加標(biāo)量為例）見圖3。三個平行樣品的低中高平均回收率分別為98.04%，94.40%，95.61%。
圖3 nmba加標(biāo)量為200 ng時氯沙坦鉀溶液色譜圖
2.5 檢測結(jié)果：三批樣品中nmba均低于小檢出限（lod）。
3、 結(jié)論
本工作建立了使用lcms-8050三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀測定氯沙坦鉀原料藥中n-亞硝基-n-甲基-4-氨基丁酸（nmba）雜質(zhì)的方法，在0.5~100 ng/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，檢出限和定量限分別為0.5 ng/ml和1.0 ng/ml。使用此方法對三批次氯沙坦鉀原料藥進(jìn)行了測定，結(jié)果為nmba未檢出。本方法簡單、快速、靈敏、準(zhǔn)確，可有效用于氯沙坦鉀原料藥中nmba的分析檢測。