目的：為檢測和定量人血漿中目標(biāo)制劑混合物開發(fā)一種靈敏、耐用和可重現(xiàn)的 lc-ms/ms 分析 方法
前言：在大多數(shù)制藥企業(yè)中，小分子候選藥物作為新化學(xué)實體或仿制藥，占據(jù)了藥物發(fā)現(xiàn)管道 的大部分比例。目標(biāo)定量分析是工作流程的一個關(guān)鍵組成部分，其要求成功開發(fā)出 小分子藥物。而這些目標(biāo)定量分析必須在生物基質(zhì)中完成，因此，常常帶來分析挑戰(zhàn)。 在本項研究中，我們報道了為大鼠血漿中多個藥物標(biāo)準(zhǔn)品開發(fā)的靈敏、耐用、可靠和可 重現(xiàn)的 lc-ms/ms 分析方法。
實驗：樣品制備 采用乙腈（acn): 血漿 =3:1 破壞血漿，從而制備已破壞的血漿 儲備液。將制備的溶液在 10,000 rpm 下離心 10 分鐘。去除上 清液，并加入等體積的水，終得到已破壞血漿的儲備原液。 將已破壞血漿儲備混合液中每種標(biāo)準(zhǔn)化合物濃度為 1 mg/ml 的 儲備液稀釋至
1 pg/ml–25,000 pg/ml 和 10 pg/ml-100,000 pg/ml。將同位 素標(biāo)記的內(nèi)標(biāo)化合物加入到每個校正水平上，從而得到終濃 度為 0.5ng/ml 的內(nèi)標(biāo)溶液。所有試劑均購自 cerilliant 公司（朗 德羅克，得克薩斯州），濃度為 1 mg/ml 的甲醇溶液。
液相色譜法：采用 thermo scientifictm vanquishtm horizon hplc 系統(tǒng) 進(jìn)行色譜分離。所使用的色譜柱為 thermo scientifictm hypersil goldtm aq c18 極性封端 lc 色譜柱（100 × 2.1 mm，1.9 µm 粒徑）。流動相 a 和 b 分別為 10 mm 甲 酸銨水溶液（采用 fisher chemicaltm optimatm 級純水） 和 0.1% 甲酸乙腈溶液。柱溫為 50 ℃?？傔\(yùn)行時間為 3.5 分鐘（表 1）。
質(zhì)譜分析法 采用 thermo scientifictm tsq altistm 三重四極桿質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì) 譜分析，配置 thermo scientifictm optamaxtm ng 離子源室。 表 2 和表 3 顯示了實驗設(shè)置中使用的質(zhì)譜儀離子源和 srm 參 數(shù)。
數(shù)據(jù)分析 采用 thermo scientifictm tracefindertm 軟件采集并處理數(shù)據(jù)。
結(jié)果與討論：研究發(fā)現(xiàn)，采用 tsq altis ms 測得的每個候選藥物的定量下限 （lloq）明顯低于采用以前幾代 ms 系統(tǒng)的測量值（表 4）。 此外，內(nèi)標(biāo)化合物的 %cv 值顯著降低也意味著 tsq altis 質(zhì)譜 的耐用性和重現(xiàn)性更優(yōu)。300 pg/ml qc 2 的典型色譜圖見圖 1。 qc 線性和重現(xiàn)性的更多詳細(xì)信息見表 5